Metadata language
Łukomska, Barbara (Promotor) ; Stanaszek, Luiza Róża (Promotor pomocniczy)
Publisher:Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im.M. Mossakowskiego PAN
Place of publishing: Date issued/created: Degree name: Level of degree: Degree discipline : Subject and Keywords:Choroba demielinizacyjna ; Komórki macierzyste ; Neuregulina-1 ; Wektor lentiwirusowy
Abstract:
Celem moich badań była weryfikacja hipotezy zakładającej, że nadekspresja neureguliny-1 w glejowo-specyficznych komórkach progenitorowych (GRPs) zmienia ich właściwości funkcjonalne, które mogą być istotne dla zwiększenia potencjału zastosowania GRPs w terapii chorób związanych z demielinizacją. Przedmiotem prowadzonych przeze mnie badań były GRPs izolowane z tkanki nerwowej płodów myszy (mGRPs). Modyfikacje genetyczne mGRPs w celu wywołania nadekspresji neureguliny1 typu I (NRG-1 typu I) przeprowadzone zostały poprzez transdukcję komórek wektorami lentiwirusowymi kodującymi NRG-1 typu I. Badania dotyczyły analizy poziomu ekspresji NRG-1 w zmodyfikowanych mGRPs, ich fenotypu, oraz właściwości funkcjonalnych mGRPs-NRG-1 in vitro. Ocena mGRPs transdukowanych wektorem pLenti-GIII-CMV-NRG-1 typ I-mCherry (NRG-1 typ I) wykazała, że komórki te w kolejnych próbach transdukcji prezentują zróżnicowany poziom syntezy transkryptu dla NRG-1 typu I, a ich dalsza hodowla skutkuje spontanicznym odklejaniem się komórek od powierzchni naczynia hodowlanego i ich śmiercią. Negatywne wyniki transdukcji mGRPs wektorem pLenti-GIII-CMV-NRG-1 typ I-mCherry skłoniły mnie, aby w kolejnym etapie badań zastosować do transdukcji mGRP wektor HIV-SFFV-NRG1 typ I-IRES-mRFP, kodujący sekwencje NRG-1 typu I i fluorescencyjne białko reporterowe mRFP, przedzielone sekwencją IRES (ang. Internal Ribosome Entry Site, wewnętrzne miejsce wiązania rybosomu), umożliwiającą ko-ekspresję obydwu sekwencji pod kontrolą transkrypcyjną wspólnego promotora, lecz z niezależnie zachodzącą translacją. W kolejnym etapie badań podjąłem próbę transdukcji mGRPs lentiwirusowymi cząstkami aktywacyjnymi, zaprojektowanymi w celu nadekspresji endogennego genu kodującego NRG-1 (NRG1-LAPs). Jednak, jednoczesna transdukcja mGRPs trzema wektorami lentiwirusowymi wchodzącymi w skład systemu NRG-1-LAPs, okazała się nieskuteczna. W związku z tym próba wywołania w mGRPs nadekspresji endogennej NRG-1 poprzez transdukcję komórek lentiwirusowymi cząstkami aktywacyjnymi nie powiodła się. Wobec niepowodzeń związanych z modyfikacjami genetycznymi mGRPs w kierunku nadekspresji NRG-1, postanowiłem przeprowadzić dodatkowe badania, oparte na stymulacji mGRPs egzogennym rekombinowanym peptydem neureguliną-1 z myszy (rmNRG-1), poprzez suplementację nim standardowej pożywki, w której hodowano komórki. Suplementacja mGRPs peptydem rmNRG-1 miała zróżnicowany wpływ na fenotyp komórek w hodowli in vitro. Na podstawie przeprowadzonych badań można sformułować następujące wnioski: - nadekspresja NRG-1 typu I, wywołana poprzez transdukcję mGRPs wektorami lentiwirusowymi, powoduje spadek tempa wzrostu tych komórek i stymuluje ich różnicowanie w kierunku 2 oligodendrocytów, nie stwierdziłem jednak istotnego wpływu nadekspresji NRG-1 typu I na właściwości mielinizacyjne mGRPs - moje wstępne badania dotyczące stymulacji mGRPs egzogennym rekombinowanym peptydem neureguliną-1 sugerują zwiększoną proliferację i spowolnienie migracji suplementowanych mGRPs, przy jednoczesnym spadku zdolności tych komórek do różnicowania w dojrzałe oligodendrocyty - wyniki badań przedstawionych w mojej rozprawie doktorskiej wskazują, że wpływ neureguliny-1 na właściwości funkcjonalne mGRPs jest zależny od zastosowanego układu doświadczalnego.
Licencja Creative Commons Uznanie autorstwa 4.0
Terms of use:Zasób chroniony prawem autorskim. [CC BY 4.0 Międzynarodowe] Korzystanie dozwolone zgodnie z licencją Creative Commons Uznanie autorstwa 4.0, której pełne postanowienia dostępne są pod adresem: ; -
Digitizing institution:Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego Polskiej Akademii Nauk
Original in:Biblioteka Instytutu Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN
Projects co-financed by: Access: